Kaip išskirti DNR iš bet kurios ląstelės
Lengvas DNR išskyrimas iš visko, kas gyva
BlackJack3D / Getty Images
DNR arba dezoksiribonukleorūgštis yra ta molekulė, kuri koduoja genetinę informaciją daugumoje gyvų organizmų. Kai kurie bakterijos naudoja RNR dėl jų genetinio kodo, tačiau bet kuris kitas gyvas organizmas veiks kaip DNR šaltinis šiame projekte. Lengva išgauti ir išskirti DNR, kurią vėliau galėsite panaudoti tolesniems eksperimentams.
DNR ekstrahavimo medžiagos
Nors galite naudoti bet kokį DNR šaltinį, kai kurie veikia ypač gerai. Žirniai, tokie kaip džiovinti skaldyti žalieji žirneliai, yra puikus pasirinkimas. Kitos galimybės yra špinatų lapai, braškės, vištienos kepenėlės ir bananai. Nenaudokite gyvų žmonių ar naminių gyvūnėlių DNR, nes tai yra paprastas etikos reikalas. Įsitikinkite, kad jūsų mėginyje iš tikrųjų yra daug DNR. Seni kaulai, dantys ar lukštai daugiausia susideda iš mineralų ir tik genetinės medžiagos pėdsakų.
- 100 ml (1/2 puodelio) DNR šaltinio
- 1 ml (⅛ arbatinio šaukštelio) valgomosios druskos, NaCl
- 200 ml (1 puodelis) šalto vandens
- Fermentai į denatūruoti baltymai (pvz., mėsos minkštiklis, šviežių ananasų sultys arba kontaktinių lęšių valymo tirpalas)
- 30 ml (2 šaukštai) skysto indų ploviklio
- 70-90 proc. trindamas alkoholiu arba kitas izopropilo arba etilo alkoholis
- Blenderis
- Koštuvas
- Puodelis ar dubuo
- Mėgintuvėliai
- Šiaudeliai arba mediniai iešmeliai
Atlikite DNR ekstrakciją
- Sumaišykite 100 ml DNR šaltinio, 1 ml druskos ir 200 ml šalto vandens. Tai užtrunka apie 15 sekundžių, esant aukštam nustatymui. Jūs siekiate a vienalytis sriubos mišinys. Maišytuvas suskaido ląsteles, išskirdamas viduje saugomą DNR.
- Supilkite skystį per sietelį į kitą indą. Jūsų tikslas yra pašalinti dideles kietąsias daleles. Laikykite skystį; išmeskite kietąsias medžiagas.
- Į skystį įpilkite 30 ml skysto ploviklio. Išmaišykite arba pasukite skystį, kad jis susimaišytų. Prieš pereidami prie kito žingsnio, leiskite šiam tirpalui sureaguoti 5–10 minučių.
- Į kiekvieną buteliuką ar tūbelę įpilkite nedidelį žiupsnelį mėsos minkštiklio arba ananasų sulčių arba kontaktinių lęšių valiklio tirpalo. Švelniai pasukiokite turinį, kad įtrauktų fermentą. Stipriai maišant DNR bus pažeista ir ją bus sunkiau matyti talpykloje.
- Pakreipkite kiekvieną mėgintuvėlį ir užpilkite alkoholio kiekvieno stiklo ar plastiko šone, kad susidarytų plūduriuojantis sluoksnis ant skysčio. Alkoholis yra mažiau tankus nei vanduo, todėl jis plūduriuos ant skysčio, bet nesinori jo pilti į vamzdelius, nes tada jis susimaišys. Jei išnagrinėsite sąsają tarp alkoholio ir kiekvieno mėginio, turėtumėte matyti baltą siūlų masę. Tai yra DNR!
- Naudokite medinį iešmelį arba šiaudelį, kad gautumėte ir surinktumėte DNR iš kiekvieno mėgintuvėlio. Galite ištirti DNR naudodami mikroskopą ar padidinamąjį stiklą arba įdėti į nedidelį indą su alkoholiu, kad išsaugotumėte.
Kaip tai veikia
Pirmiausia reikia pasirinkti šaltinį, kuriame yra daug DNR. Nors galite naudoti DNR iš bet kur , šaltiniai, kuriuose yra daug DNR, pabaigoje duos daugiau produkto. Žmogaus genomas yra diploidas , tai reiškia, kad jame yra dvi kiekvienos DNR molekulės kopijos. Daugelyje augalų yra kelios jų genetinės medžiagos kopijos. Pavyzdžiui, braškės yra oktoploidinės ir turi 8 kiekvienos chromosomos kopijas.
Sumaišius mėginį, ląstelės suskaidomos, kad galėtumėte atskirti DNR nuo kitų molekulių. Druska ir ploviklis pašalina baltymus, paprastai prisijungusius prie DNR. Ploviklis taip pat atskiria lipidus (riebalus) nuo mėginio. Fermentai naudojami DNR pjaustymui. Kodėl norėtumėte jį nupjauti? DNR yra sulankstyta ir apvyniota aplink baltymus, todėl ją reikia atlaisvinti prieš išskiriant.
Atlikus šiuos veiksmus, DNR bus atskirta nuo kitų ląstelių sudedamųjų dalių, bet vis tiek ją reikia išimti iš tirpalo. Čia ir atsiranda alkoholis. Kitos mėginio molekulės ištirps alkoholyje, bet DNR ne. Kai ant tirpalo pilate alkoholio (kuo šaltesnis, tuo geriau), DNR molekulė nusėda, kad galėtumėte ją surinkti.
Šaltiniai
- Elkinsas, K.M. (2013). 'DNR ekstrahavimas'. Teismo ekspertizės DNR biologija . 39–52 p. doi:10.1016/B978-0-12-394585-3.00004-3. ISBN 9780123945853.
- Milleris, D. N.; Bryantas, J. E.; Madsen, E.L.; Ghiorse, W.C. (1999 m. lapkritis). „Dirvožemio ir nuosėdų mėginių DNR ekstrahavimo ir gryninimo procedūrų įvertinimas ir optimizavimas“. Taikomoji ir aplinkos mikrobiologija . 65 (11): 4715–24.